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全自動細胞計數(shù)儀的計數(shù)方法及其應用分析

更新時間:2022-11-22點擊次數(shù):927
  全自動細胞計數(shù)儀的計數(shù)方法:
 
  (1)臺盼藍染色法
 
  臺盼藍染色是分別計數(shù)死亡細胞和活細胞的方法之一。染色的原理是臺盼藍無法穿透活細胞的完整細胞膜,因此活細胞不被染色;然而,死亡細胞的細胞膜被破壞,染料通過細胞膜在細胞中富集,使細胞變藍。然而,臺盼藍染色可能無法準確區(qū)分有核細胞和細胞碎片,因此它傾向于低估細胞總數(shù)并高估細胞生存能力。
 
  (2)熒光細胞計數(shù)法
 
  吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)染色原理:活細胞通過AO染色發(fā)出綠色熒光,而死細胞通過PI染色發(fā)出紅色熒光。重要的是,對于具有復雜背景的細胞,例如外周血單核細胞,具有更多細胞片段或簇的細胞數(shù)量可以避免檢測到細胞片段。這種方法最近也被應用于單細胞基因組學,其中綠色對應于完整的細胞,紅色對應于成功分離的細胞核。該策略允許研究人員計算未裂解的剩余細胞在細胞總數(shù)中的百分比,并計數(shù)細胞核以指示樣品質量,幫助研究人員確定是否繼續(xù)單細胞基因組學過程。
 
  全自動細胞計數(shù)儀在單細胞測序中的應用如下:
 
  單細胞基因組學技術目前正在全面應用,如單細胞RNA測序(scRNA-seq)和染色質轉座酶可及性測序(ATAC-seq)。與對大量細胞進行測序的傳統(tǒng)方法相比,單細胞基因組學技術突出了細胞之間的差異,這有助于更深入地了解樣本材料。例如,scRNA-seq可以比較健康和患病狀態(tài)的轉錄譜,而ATAC-seq可以解釋染色質的可及性及其對基因表達的影響。
 
  然而,這些研究都需要對分離的細胞核進行精確計數(shù),因為文庫制備需要少量未裂解的細胞,并且樣品中沒有細胞團塊和碎片。此外,許多單細胞基因組學技術需要完整的細胞核才能正常工作。
 
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